کلونینگ و توالی یابی پلاسمید کد کننده پروتئین میکرونم ۳ (mic۳) توکسوپلاسما گوندی

سابقه و هدف: توکسوپلاسما گوندی، انگل تک یاخته درون سلولی اجباری و عامل توکسوپلاسموزیس در انسان و حیوانات بوده که در سراسر جهان انتشار دارد. پروتئین میکرونم 3 (mic3) با وزن ملکولی 90 کیلو دالتون، عامل چسبیدن انگل به سلولهای میزبان در آغاز تهاجم است و در تمام مراحل تکاملی از انگل ترشح شده و یک آنتی ژن قوی محسوب می شود؛ از این نظر علاوه بر ایمونوژن بودن و کاندید ساخت واکسن، در تشخیص نیز کاربرد دارد. هدف از این تحقیق، آماده سازی ژن mic3 در پلاسمید ناقل جهت ساب کلونینگ در پلاسمیدهای یوکاریوت و پروکاریوت است. مواد و روش ها: dna ژنومی توکسوپلاسما، با روش فنل-کلروفرم استخراج شد. با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن mic3، ژن مورد نظر با روش pcr تکثیر شده و با استفاده از ژل آگارز، الکتروفورز گردید. محصول pcr، خالص شده و به کمک آنزیم t4dna ligase، به داخل یک وکتور کلونینگ کلون شد. در نهایت پلاسمید نوترکیب به داخل e.coli سوش top10 ترانسفورم گردید. با روش های pcr و برش آنزیمی و توالی یابی، کلون مورد نظرتائید شد.نتایج: محصول pcr به صورت یک باند 1052 جفت باز در ژل آگارز 1 درصد مشاهده گردید. پلاسمیدهای نوترکیب تحت برش آنزیمی دو آنزیم محدود کننده hindiii و ecorv قرار گرفت و دو باند 1052 و 2886 جفت باز به دست آمد که نشان داد قطعه mic3 در پلاسمید ptz57r/t کلون شده است.نتیجه گیری: نتایج به دست آمده نشان داد، کلونینگ و ترانسفورم ژن mic3 در پلاسمید ptz57r/t با موفقیت انجام شده است.